7° Encuentro 6 de agosto

Hoy fuimos con Pablo al cuarto de medio de cultivo para ver, donde preparó los medios para las células de melanoma (WM9 y LU). Este medio tiene rojo fenol (el cual vira a amarillo a medida que cambia el pH, cuando se van consumiendo los nutrientes), suero fetal bobino (para que crezcan las células), luego se le pone un poco de medio a las células y se centrifuga, se coloca más medio y se mueven las placas para que se dispersenlas células por toda la placa.
El rojo fenol sirve para indicar cuando se van consumiendo los nutrientes; cuando pasa esto se debe cambiar el medio.
Luego, preparó medio con neomicina, para que solamente vivan las células que tengan el plásmido con resistencia a este gen.

6° Encuentro 25 de junio

Hoy hicimos una purificación de ARN (extracción de ARN de células). Para todo este procedimiento hay kits que ya vienen preparados para cada purificación específica; los filtros y los pasos a seguir en cada una de las etapas. Luego fuimos fuimos al espectrofotometro para ver la concentración de ARN obtenida. Este este espectrofotometro es muy avanzado, digital e imprime todos los resultados. Luego guardamos el ARN purificadp en el freezer a -70°C, para cuendo se necesite para algún ensayo.

5° Encuentro 18 de junio

Hoy se vimos los resultados de la transfección de las células pero con el plásmido con el antiduerpo STAT3Y, el cual funcionó bajo la actividad de luciferasa de STAT3
Los que queda de actividad de luciferasa es de los demás factores detranscripción
Se llegó a la conclusión de que STAT3Y inhibe la actividad de STAT3
Vimos una PCR, y nos contaron todo el procedimiento que se debe hacer, y el objetivo del mismo
Pablo, nos explicó sobre el significado biológico de STAT3 y PDK1, su relación con los melanomas. También nos explicó distintos procedimientos en el laboratorio, como lo son la tranfección transciente y la estable, y cuales son sus ventajas y desventajas.
Luego de estas explicaciones realizamos una preparación de plásmido (hay tres tipos de preparaciones que dependen de la cantidad de plásmido que yo necesito; Mini, Midi y Maxi)

4° Encuentro 4 de junio

Hoy realizamos un western blot.
Analizamos los resultados de las anteriores electroforesis.
El plásmido amarillo, el plásmido rosa y el control igual, por lo que se realizó un western de vueltacon otro dominante negativo de STAT3 . Así dio una banda más por lo que se sacó la conclusión de que STAT3 está presente en el tubo rosa

3° Encuentro 28 de mayo

Hoy vimos las celulas transfectadas y no (todo el campo de visión) con el plásmido (tubos rosa y amarillo) en el microscopio óptico (luz blanca) en la sala de medio de cultivo.
Luego fuimos a cuarto donde a traves de otro microscopio con luz ultravioleta, nos permite ver las células que fueron transfectadas con el plásmido. Las que fueron transfectadas se ven fluorescentes (verdes).
Vimos cómo se hace un western blot, y todos los recaudos que hay que tener en cuenta.