11º Encuentro

Tuvimos una clase teórica con Pablo.
Luego hicimos los lavados de una membrana de nitrocelulosa con el anticuerpo primario, PBS twin y con el anticuerpo secundario.
Dependiendo del origen del anticuerpo primario, se debe elegir el anticuerpo secundario)debe ser del mismo origen)

Preparamos un gel de agarosa donde sembramos distintas muestras de ADN (productos de PCR clonados de STAT3Y)

Preparamos PBS twin.

10º Encuentro

Vimos como se hace una PCR en Tiempo Real, la cual sirve para cuantificar.

9º Encuentro

Fuimos al microscopio de fluorescencia a ver las células con transfecciòn transciente (estas fueron transfectadas con una plasmido con GFP, green fluorescent protein, y un antibiótico)

Las células que han sido transfectadas se ven verde flúor

Medimos la densidad óptica de un medio con bacterias en el espectrofotometro. Luego, se sigue un protocolo para que sean competentes e incorporen un plasmido.

8º Encuentro 3/09

Hoy fuimos el ibyme y aunque nuestro investigador no fue y no tuvimos mucho que hacer, sembramos un Western Blot y luego seguimos con las explicaciones teoricas acerca de los senderos del proyecto y que se espera a futuro. Finalmente nos explicaron temas sobre Biologia Celular y genetica como eleccion de primers para PCR o analisis de resultados de diferentes pruebas de Marcadores moleculares como RFLP, VNTR, RAPD o SNP.

7° Encuentro 6 de agosto

Hoy fuimos con Pablo al cuarto de medio de cultivo para ver, donde preparó los medios para las células de melanoma (WM9 y LU). Este medio tiene rojo fenol (el cual vira a amarillo a medida que cambia el pH, cuando se van consumiendo los nutrientes), suero fetal bobino (para que crezcan las células), luego se le pone un poco de medio a las células y se centrifuga, se coloca más medio y se mueven las placas para que se dispersenlas células por toda la placa.
El rojo fenol sirve para indicar cuando se van consumiendo los nutrientes; cuando pasa esto se debe cambiar el medio.
Luego, preparó medio con neomicina, para que solamente vivan las células que tengan el plásmido con resistencia a este gen.

6° Encuentro 25 de junio

Hoy hicimos una purificación de ARN (extracción de ARN de células). Para todo este procedimiento hay kits que ya vienen preparados para cada purificación específica; los filtros y los pasos a seguir en cada una de las etapas. Luego fuimos fuimos al espectrofotometro para ver la concentración de ARN obtenida. Este este espectrofotometro es muy avanzado, digital e imprime todos los resultados. Luego guardamos el ARN purificadp en el freezer a -70°C, para cuendo se necesite para algún ensayo.

5° Encuentro 18 de junio

Hoy se vimos los resultados de la transfección de las células pero con el plásmido con el antiduerpo STAT3Y, el cual funcionó bajo la actividad de luciferasa de STAT3
Los que queda de actividad de luciferasa es de los demás factores detranscripción
Se llegó a la conclusión de que STAT3Y inhibe la actividad de STAT3
Vimos una PCR, y nos contaron todo el procedimiento que se debe hacer, y el objetivo del mismo
Pablo, nos explicó sobre el significado biológico de STAT3 y PDK1, su relación con los melanomas. También nos explicó distintos procedimientos en el laboratorio, como lo son la tranfección transciente y la estable, y cuales son sus ventajas y desventajas.
Luego de estas explicaciones realizamos una preparación de plásmido (hay tres tipos de preparaciones que dependen de la cantidad de plásmido que yo necesito; Mini, Midi y Maxi)