11º Encuentro

Tuvimos una clase teórica con Pablo.
Luego hicimos los lavados de una membrana de nitrocelulosa con el anticuerpo primario, PBS twin y con el anticuerpo secundario.
Dependiendo del origen del anticuerpo primario, se debe elegir el anticuerpo secundario)debe ser del mismo origen)

Preparamos un gel de agarosa donde sembramos distintas muestras de ADN (productos de PCR clonados de STAT3Y)

Preparamos PBS twin.

10º Encuentro

Vimos como se hace una PCR en Tiempo Real, la cual sirve para cuantificar.

9º Encuentro

Fuimos al microscopio de fluorescencia a ver las células con transfecciòn transciente (estas fueron transfectadas con una plasmido con GFP, green fluorescent protein, y un antibiótico)

Las células que han sido transfectadas se ven verde flúor

Medimos la densidad óptica de un medio con bacterias en el espectrofotometro. Luego, se sigue un protocolo para que sean competentes e incorporen un plasmido.

8º Encuentro 3/09

Hoy fuimos el ibyme y aunque nuestro investigador no fue y no tuvimos mucho que hacer, sembramos un Western Blot y luego seguimos con las explicaciones teoricas acerca de los senderos del proyecto y que se espera a futuro. Finalmente nos explicaron temas sobre Biologia Celular y genetica como eleccion de primers para PCR o analisis de resultados de diferentes pruebas de Marcadores moleculares como RFLP, VNTR, RAPD o SNP.

7° Encuentro 6 de agosto

Hoy fuimos con Pablo al cuarto de medio de cultivo para ver, donde preparó los medios para las células de melanoma (WM9 y LU). Este medio tiene rojo fenol (el cual vira a amarillo a medida que cambia el pH, cuando se van consumiendo los nutrientes), suero fetal bobino (para que crezcan las células), luego se le pone un poco de medio a las células y se centrifuga, se coloca más medio y se mueven las placas para que se dispersenlas células por toda la placa.
El rojo fenol sirve para indicar cuando se van consumiendo los nutrientes; cuando pasa esto se debe cambiar el medio.
Luego, preparó medio con neomicina, para que solamente vivan las células que tengan el plásmido con resistencia a este gen.

6° Encuentro 25 de junio

Hoy hicimos una purificación de ARN (extracción de ARN de células). Para todo este procedimiento hay kits que ya vienen preparados para cada purificación específica; los filtros y los pasos a seguir en cada una de las etapas. Luego fuimos fuimos al espectrofotometro para ver la concentración de ARN obtenida. Este este espectrofotometro es muy avanzado, digital e imprime todos los resultados. Luego guardamos el ARN purificadp en el freezer a -70°C, para cuendo se necesite para algún ensayo.

5° Encuentro 18 de junio

Hoy se vimos los resultados de la transfección de las células pero con el plásmido con el antiduerpo STAT3Y, el cual funcionó bajo la actividad de luciferasa de STAT3
Los que queda de actividad de luciferasa es de los demás factores detranscripción
Se llegó a la conclusión de que STAT3Y inhibe la actividad de STAT3
Vimos una PCR, y nos contaron todo el procedimiento que se debe hacer, y el objetivo del mismo
Pablo, nos explicó sobre el significado biológico de STAT3 y PDK1, su relación con los melanomas. También nos explicó distintos procedimientos en el laboratorio, como lo son la tranfección transciente y la estable, y cuales son sus ventajas y desventajas.
Luego de estas explicaciones realizamos una preparación de plásmido (hay tres tipos de preparaciones que dependen de la cantidad de plásmido que yo necesito; Mini, Midi y Maxi)

4° Encuentro 4 de junio

Hoy realizamos un western blot.
Analizamos los resultados de las anteriores electroforesis.
El plásmido amarillo, el plásmido rosa y el control igual, por lo que se realizó un western de vueltacon otro dominante negativo de STAT3 . Así dio una banda más por lo que se sacó la conclusión de que STAT3 está presente en el tubo rosa

3° Encuentro 28 de mayo

Hoy vimos las celulas transfectadas y no (todo el campo de visión) con el plásmido (tubos rosa y amarillo) en el microscopio óptico (luz blanca) en la sala de medio de cultivo.
Luego fuimos a cuarto donde a traves de otro microscopio con luz ultravioleta, nos permite ver las células que fueron transfectadas con el plásmido. Las que fueron transfectadas se ven fluorescentes (verdes).
Vimos cómo se hace un western blot, y todos los recaudos que hay que tener en cuenta.

2º Encuentro IByME

Hoy fuimos a las 9 de la mañana al IByME y nos encontramos con nuestro investigador Pablo Lopez Bergami: Nos contó las pruebas y exámenes que habían realizado a lo largo de esta semana, y los resultados que habían obtenido.

Luego, Tini ( una de las chicas que esta en el equipo de Pablo) preparo una electroforesis en gel con 7 muestras + un marcador de Peso molecular, y nosotros vimos el procedimiento. En cada una de las calles se pusieron diferentes combinaciones de plasmidos + inserto en pos de verificar la capacidad de adquirir el inserto los plasmidos, para tal se realizaron previamente cortes con las enzimas de restriccion Bam H1 y Sal 3 y sus respectivas ligaciones, y un shock termico final.
En las imagenes podremos ver fotos de los procedimientos y los resultados luego de la revelacion con luz uv y bromuro de etidio ( nos tuvimos que quedar hasta las 2:30 para poder verlo, lo que es la disposicion)
A su vez, en los videos veremos diferentes explicaciones que realizo Tini durante el procedimiento

Videos en progreso de uploading

1º Encuentro IByME!!

Bueno, este jueves tuvimos el primer encuentro en el IByME. Mucho frio pero el amor a la ciencia nos lleva. Ya adentro recorrimos las instalaciones, vimos fotos de investigadores que estuvieron alli y luego el Dr. pablo nos dio un pantallazo de lo que seria el topico de este año y en lo que nos vamos a concentrar. Tuvimos una clase introductoria un poco larga, pero bastante amena, tomando en cuenta la complejidad con la que se ve el tema en estos centros de investigacion.